隨著當今化學家不斷為新型藥物和生物制藥產品開發(fā)出新的分析方法，選擇重現(xiàn)性優(yōu)良的HPLC色譜柱變得至關重要。選用的色譜柱應能在新型藥品的整個生命周期內得到一致的色譜結果。Symmetry、SymmetryShield?和Symmetry300?色譜柱優(yōu)異的重現(xiàn)性是沃特世在HPLC色譜柱領域不斷改進，精益求精的成果。

  每根Symmetry色譜柱都附帶一份COA報告(Certificate of Analysis)和一份性能測試色譜圖。COA報告為Symmetry色譜柱中所用的填料批次所特有，包括凝膠批號、未鍵合顆粒和鍵合填料分析結果，以及色譜結果和檢測條件。性能測試色譜圖則會提供每根色譜柱的以下信息：凝膠批號、色譜柱序列號、USP理論塔板數(shù)、USP拖尾因子、容量因子以及色譜條件。

這些數(shù)據(jù)應妥善保存，以備將來參考。

a. 色譜柱安裝

注：下述步驟中給出的流速適用于典型的4.6 mm內徑色譜柱。可根據(jù)所安裝Symmetry色譜柱的柱內徑、柱長、粒徑和柱壓相應地提高或降低流速。色譜柱內徑和/或柱長改變時，請參閱“放大/縮小等度分離方法”部分計算流速。有關HPLC連接的詳細信息，請參閱“將色譜柱連接到HPLC”部分。

1. 灌注泵系統(tǒng)，排出含緩沖液的流動相，然后將色譜柱的入口端連接至進樣器出口。

2. 用100%有機流動相（甲醇或乙腈）沖洗色譜柱，泵流速設置為0.1 mL/min，并在5 min內增加至1 mL/min。

3. 當流動相可從色譜柱出口自由流出時，停止液流并將色譜柱出口連接至檢測器。這樣可以防止空氣進入檢測系統(tǒng)，使系統(tǒng)更快達到基線平衡。

4. 按照步驟2所述逐漸增加流速。

5. 一旦柱壓和基線達到穩(wěn)定狀態(tài)，即可繼續(xù)進行下一部分操作。

b. 色譜柱平衡

Symmetry色譜柱出廠時用100%乙腈保存。在更換為其他流動相體系之前，務必確保流動相的兼容性。請用至少10倍柱體積的流動相平衡色譜柱（請參閱表1中的空色譜柱體積）。為避免流動相緩沖液在色譜柱或系統(tǒng)中發(fā)生沉淀，請使用5倍柱體積的水/有機溶劑混合物沖洗色譜柱，其中有機溶劑比例應與所需緩沖流動相中的有機溶劑比例相同或更低。（例如，使用60%甲醇水溶液沖洗色譜柱和HPLC系統(tǒng)，然后再引入60%甲醇/40%緩沖液組成的流動相）。

注：如果流動相中含有低濃度添加劑（例如離子對試劑），那么完成平衡可能需要100-200倍柱體積的流動相。此外，當流動相中含有甲酸鹽時（如甲酸銨、甲酸等），初始柱平衡時間也可能較長。

c. 初始柱效測定

1. 使用色譜柱之前，需要先進行一次柱效測試。沃特世建議您在收到色譜柱后使用合適的溶質混合物（例如“性能測試色譜圖”中給出的溶質混合物）對色譜柱進行測試。

2. 測定理論塔板數(shù)(N)，并定期對比該數(shù)值。

3. 按預定的時間間隔進行重復測試，跟蹤色譜柱性能隨時間的變化情況。采用兩套不同的HPLC系統(tǒng)進行測試時，所得柱效結果可能會有微小差異，這可能是由于連接質量、運行環(huán)

境、系統(tǒng)電子設備、試劑質量、色譜柱條件和操作員技術等因素所致。