牛奶中氟苯尼考檢測的固相萃取方法
一、實驗?zāi)康?span lang="EN-US">
本研究利用固相萃取作為樣品前處理方法，HPLC作為分析方法，檢測牛奶樣品中的氟苯尼考殘留水平。該方法操作簡便，可簡化樣品前處理過程，減少有機溶劑的使用。
二、實驗?zāi)繕宋?span lang="EN-US">
氟苯尼考（CAS:
73231-34-2）。
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于牛奶中氟苯尼考的檢測的HPLC檢測及確證。
四、實驗材料
SimplyGreen HLB 固相萃取柱 60mg/3mL(Cat. No.)。
五、實驗步驟
1、樣品提取
準確稱取牛奶2 g（精確到0.001 g），加入乙酸乙酯15 mL，高速均質(zhì)1 min，加入5
g無水硫酸鈉，渦旋振蕩1 min，搖床振蕩10 min。4000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min。將上清液轉(zhuǎn)移至梨形瓶中，于45 ℃旋蒸至近干，用6 mL水溶解殘渣，5 mL×2次正己烷除脂，棄去正己烷層，取3 mL水層待凈化。
2、SPE柱凈化
(1) 活化：HLB 固相萃取柱使用前依次使用5 mL甲醇和5 mL水活化。
(2) 上樣和洗脫：將待凈化液加入已活化好的固相萃取柱中，以2 mL/min的流速過柱，棄去濾液，用5 mL水淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，抽干5 min。用5 mL 5%氨化甲醇洗脫固相萃取柱，收集洗脫液。
(3) 重新溶解：洗脫液于45 ℃氮吹吹干，用1 mL甲醇定容，0.22 μm微孔濾膜過濾，供HPLC上機測試。
3、HPLC條件
設(shè)備：Waters Alliance 2690
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5μm )
檢測器：Waters 2487 紫外檢測器
檢測波長：224 nm
流動相：A：水 B：乙腈
洗脫方式：等度洗脫
表1 流動相等度洗脫條件
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時間/min
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A(%)
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B(%)
|
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20.00
|
83
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17
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流速1mL/min
進樣體積：20uL
五、實驗結(jié)果
1、牛奶氟苯尼考的5mg/kg添加回收結(jié)果
表2 牛奶中氟苯尼考的5mg/kg添加回收結(jié)果
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名稱
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回收率（%）
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平均回收率（%）
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RSD（%）
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1
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2
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3
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氟苯尼考
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112.34
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109.23
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111.84
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111.14
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1.50
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2、添加水平為5mg/kg牛奶中氟苯尼考殘留物色譜圖
圖1 添加水平為5mg/kg牛奶中氟苯尼考殘留物色譜圖
